YX208B型手提式不锈钢蒸汽消毒器是医疗卫生、科研单位的通用灭菌设备，主要用于培养基、玻璃器皿、无菌工作服等的消毒灭菌。根据GMP（98版）第57条、58条规定药品生产的关键设备需验证^［1］，药品《认证检查标准》也规定关键设备的验证内容应包括灭菌设备^［2］，对药品生产中灭菌所用的YX208B型手提式不锈钢蒸汽消毒器应进行验证, 以确保物料灭菌符合规定要求。

设备验证包括预确认、安装确认、运行确认和性能确认。本次主要通过热分布试验、生物指示剂试验来验证该设备运行能否达到灭菌要求。

(1)手提式不锈钢蒸汽消毒器（YX208B型，上海三申医疗器械有限公司）；留点温度计（上海宜川仪表厂）；嗜热脂肪芽孢杆菌指示剂（福建省药检所）。

(2)温度探头的筛选，实验所用的温度计均由福建省计量检验所检定合格后投入使用。

热分布测试目的：检查灭菌器箱腔内的热分布情况，检查箱腔内可能存在的冷点。

1.2.1 空载热分布实验

 

将灭菌器内装满培养基的锥形瓶，自下而上摆放。取5支经过校正的留点温度计，将其中1支的探头置于进气口处，1支探头置于排气口处，1支置于温度控制和记录的温度计旁边，其余的留点温度计均匀分布在腔内装载的各处。温度计分布情况同图1。

开启灭菌消毒器，按照121 ℃温度，运行30 min，且在运行过程中记录各个点的温度。连续运行3次，以检查其重现性，最低温度与最高温度之差应＜2 ℃。

1.2.3 热穿透试验

热穿透试验是在热分布试验的基础上，确定装载中的“最冷点”，并肯定该点在灭菌过程中获得的无菌保证值为121 ℃、≥30 min。

(1)灭菌程序：（121±2）℃×30 min。

(2)测试过程：选用500 ml锥型瓶（或90 mm培养碟）。在最大装载情况下，取5支经过校验的标准留点温度计，将其中3支分别置于进气口处的待灭菌瓶内、排气口处的待灭菌瓶内、灭菌器温度计测试点旁，其余温度计置于待灭菌瓶中，分布情况同图1。开启灭菌消毒器，按照温度121 ℃、运行30 min进行操作。

(3)生物指示剂实验：将一定量的耐热菌放入待灭菌的产品中，在设定的灭菌条件下进行灭菌，以验证设定的灭菌工艺是否确实赋予产品必须的灭菌值。

(4)验证选择：嗜热脂肪芽孢杆菌指示剂，含量1×10⁶ CFU/支。

(5)验证方法：取嗜热脂肪芽孢杆菌指示剂，均匀分布于灭菌锅的各层位置，其中3支置于热穿透试验的最冷点，按照岗位SOP进行灭菌操作，温度为115～117 ℃，灭菌时间为30 min。经过一个灭菌周期后，取出嗜热脂肪芽孢杆菌指示剂，放入恒温培养箱中，在温度为55～60 ℃下培养48 h，观察嗜热脂肪芽孢杆菌指示剂的变色情况。同时将未灭菌的嗜热脂肪芽孢杆菌指示剂进行培养，作阳性对照。连续试验3次，每次检测中，每支嗜热脂肪芽孢杆菌指示剂呈蓝紫色为合格，指示剂之一呈黄色为不合格。

 

 

空载热分布实验数据统计分析情况如表1、表2所示。运行结果表明：灭菌器箱腔内的热分布均匀，符合规定。

 

 

满载热分布实验数据统计分析情况如表3所示。运行结果表明：满载后箱内温度分布符合规定。

 

表3 满载热分布实验数据分析                          

  

热穿透实验数据统计分析情况如表4所示。运行结果表明：热穿透均匀，符合规定。

嗜热脂肪芽孢杆菌指示剂实验结果如表5所示。结果判定及评价：符合规定要求。

 

按照《微生物限度检查标准操作规程》规定的检查方法，从消毒后的培养基中每次取3瓶(分别从消毒器中不同位置)分别做碟，并同时做空白，在温度37 ℃下培养48 h，并记录菌落生长情况。具体情况如表6所示。验证结果：消毒器能确保物料灭菌合格，该高压消毒器能达到灭菌要求。